О тестах и о возможных ошибках тестирования.

Касаясь громкой новости о возможном повторном заражении Covid-19 пациента в Бурятии, хотелось бы обратить внимание на некоторые детали самого процесса тестирования - как забора материала для исследований, так и работы с тест-системой. Детали, которые, если их проигнорировать, могут привести к совершенно недостоверным результатам. И объясняют часто приводимые примеры с чередованием положительных и отрицательных результатов тестирования на 2019-nCov для одного и того же пациента. Сразу оговорюсь, речь пойдет о тестировании ПЦР (на вирусную РНК).

Первое, на что стоит обратить внимание - это забор материала. Здесь есть сразу несколько сложностей.

Можно заметить, что сам по себе способ забора материала - мазок, взятый с полости носа или задней стенки носоглотки - не слишком надежен из-за индивидуальных особенностей каждого пациента. У одного там достаточно "материала", у другого - сухость слизистых.

Далее, в РФ применяются тест-системы разных производителей. И требования, предъявляемые к забору материала - тоже разные. Кто-то рекомендует не употреблять алкоголь 24 часа перед анализом, кто-то - 3 часа воздержаться от еды и питья. Иные считают оптимальным забор материала после сна (хотя, понятно, это невозможно обеспечить всех случаях). Но, самое грустное - об этих требованиях подготовки пациенту зачастую не сообщают вовсе! А часто наперед неизвестно и в принципе - тесты какого производителя будут применяться.

Сам забор материала тоже требует исполнения четких требований. Необходимо использовать зонд-тампоны строго определенного типа (например, хлопковые нельзя), пробирки с транспортной средой. При упаковке зонд необходимо сломать (укоротить ) таким образом, чтобы обеспечить плотное закрывание крышки пробирки. Нельзя обрезать зонды ножницами! Почему это важно?

В данный момент, в РФ используются и достаточно чувствительные тест-системы. Однако, культура сбора, транспортировки и обработки материала оказалась такой, что, производителям пришлось выпускать специальные заявления:

Для предупреждения кросс-контаминации [прим. - взаимного загрязнения] биоматериалом в лаборатории рекомендуется выполнение следующих правил:

1.Необходимо проводить визуальную оценку поступившего биоматериала и выбраковку всех образцов, если среди них есть пробирки с нарушенной герметичностью

2.По возможности выделять в отдельный поток образцы от пациентов из стационара с симптомами острой инфекции и анализировать их отдельно от остальных образцов (биоматериал для скрининга контактировавших лиц и пациентов с легким течением заболевания). Работу с предполагаемыми высоко копийными образцами желательно выполнять в отдельном боксе или после работы с предполагаемыми низко копийными образцами.

3.Обязательно выполнять постановку отрицательных контрольных образцов, начиная с этапа выделения РНК, в каждом протоколе.

4.Использовать на всех этапах исследования наконечники с аэрозольными фильтрами.

5.Четко  соблюдать  методику  выполнения  исследования,  открывать пробирки типа Eppendorf при помощи пинцета (не допускать касаний рукив перчатке внутренней части крышки пробирки); при внесении реагентов не касаться наконечником пробирки (если это произошло, сразу заменить наконечник).

"ДНК-Технология", 6 апреля 2020 г.

В сущности, сбор и обработка биоматериала представляет собой весьма длинную последовательность действий и точность результата очень сильно зависит как от индивидуальных особенностей источника материала, так и от точности исполнения протокола. Очевидно, что нарушение протокола приводит как к ложноотрицательным, так и ложноположительным результатам.